Il nuovo veicolo aveva il motore V12 da 4.0 litri aggiornato con 320 CV a 6.500 giri/min e 375 Nm di coppia a 4.500 giri/min, oltre a un nuovo cambio a cinque marce progettato internamente da Lamborghini.

Ma quelli non erano l'unico cambiamento in quanto la 400 GT presentava una carrozzeria diversa dalla 350 GT con un passo più lungo che aiutava ad aggiungere altri due posti dietro i passeggeri anteriori, rendendola una 2+2 posti.

Il veicolo poteva accelerare da zero a 100 km/h (62 mph) in 7,5 secondi e a 160 km/h (160 mph) in 17,8 secondi raggiungendo una velocità massima di 270 km/h o 168 mph. La produzione della 400 GT cessò nell'estate del 1968 con una produzione totale di 273 modelli.

La Lamborghini Islero era il successore della Lamborghini 400 GT.

Altre curiositá:

La 400 GTS (Scala) è stata progettata come una delle ultime vetture da turismo nel 1966. In linea di principio, era la stessa vettura della 350 GTS, sulla quale era installato solo un motore della 400 GT.

La 400 GT Flying Star II fu presentata al Salone di Torino del 1966. Era una coupé station wagon realizzata sulla base di 400 GT 2 + 2 dalla società Touring. Il primo proprietario del pezzo unico fu il figlio della scrittrice Françoise Sagan. Dopo essere stata restaurata, la Flying Star II è stata presentata alla fiera delle auto d'epoca Retromobile a Parigi nel 1987. Il veicolo è di proprietà privata.

La Monza 400 è stata costruita dalla carrozzeria Neri e Bonacini nel 1966.

Anche se la 350 GT e la 400 GT non sono riuscite a colpire la Ferrari, hanno creato un nome per Lamborghini e, infine, hanno aperto la strada alla creazione di una delle supercar più esotiche e ricercate di tutti i tempi, la Lamborghini Miura del 1969, che ha stabilito l'azienda come un produttore di supercar esotiche.